ELISA背景色的控制技巧

要優化ELISA實驗以減少背景色，需從實驗操作、試劑管理、抗體選擇及設備控制等多方面進行系統優化。以下是具體技巧：

一、實驗操作優化

1、?充分洗滌?

延長洗滌時間至30-60秒/次，增加洗滌次數（3-5次），確保每孔注滿洗滌液并chedi拍干。

在洗滌液中添加0.05%-0.2% Tween-20等表面活性劑，增強去污效果。

2、?規范加樣?

使用校準后的移液器，加樣時槍頭傾斜避免接觸孔底，防止刮傷包被層或產生氣泡。

每孔加樣后更換槍頭，避免交叉污染。

3、?控制孵育條件?

嚴格按說明書控制孵育溫度（如37℃±0.5℃）和時間，避免溫度過高或反應時間過長導致非特異性結合。

孵育時使用封板膜密封，防止液體蒸發。

二、試劑與抗體管理

1、?優化封閉步驟?

ELISA實驗使用推薦濃度的封閉劑（如1-5% BSA或脫脂奶粉），延長封閉時間至1-2小時（必要時4℃過夜）。

若BSA存在交叉反應，可嘗試0.8%明膠作為替代封閉劑。

2、?確保試劑有效性?

檢查試劑盒有效期，顯色液需現配現用，避免重復使用或污染。

標準品和抗體嚴格按說明書稀釋，避免濃度過高。

三、設備與環境控制

1、?清潔微孔板?

檢測前用75%乙醇清潔酶標板底部，避免污漬干擾光學讀數。

2、?校準儀器?

定期校準移液器和酶標儀，確保加樣精度和檢測波長（如450nm）準確。

四、其他注意事項

?避免樣本污染?：血清/血漿樣本需避免溶血、脂濁或細菌污染，否則可能引起非特異性顯色。

?顯色與終止?：底物反應需避光，顯色后及時終止（如15分鐘內讀數），防止顏色過深導致OD值超出線性范圍。

通過以上措施，可有效降低ELISA實驗的背景信號，提升信噪比和結果可靠性。