ELISA試劑盒的穩定性如何驗證？

驗證ELISA試劑盒穩定性的方法主要包括以下幾個方面：

一、加速穩定性試驗

1、‌溫度模擬‌：

將試劑盒置于37℃環境中分別破壞24小時和72小時，模擬運輸或短期高溫條件下的穩定性。

2、‌檢測指標‌：

l ‌回收率‌：在定值樣本中加入目標物（如IL-10），測定值與理論值的比率應在70%-130%范圍內。

l ‌線性‌：樣本倍比稀釋后（如1:2至1:16），測定值與理論值的比率需符合70%-130%的線性范圍。

l ‌精密度‌：批內變異系數（CV）應<10%，批間CV<12%。

二、長期穩定性測試

1、儲存條件：按照說明書推薦的儲存條件（如2-8℃或-20℃）存儲試劑盒。

2、定期測試：在不同的時間點（如1個月、3個月、6個月）取出試劑盒，測試其性能，確保沒有顯著變化。

3、監控標準曲線：記錄每次測試的標準曲線，觀察其線性和重復性是否保持一致。

三、批間一致性（Inter-Assay Precision）

1、不同批次的測定：使用多個批次的試劑盒，對同一中等濃度樣品進行測試。

2、比較結果：檢查不同批次之間結果的差異。

3、計算CV%：與批內一致性的方法相同。

4、理想結果：CV值應低于15%，表示良好的批間一致性。‌

四、批內一致性（Intra-Assay Precision）

1、多次測定同一樣品：選擇一個中等濃度的樣品，進行多次重復測試，通常是3次或更多。

2、計算變異系數（CV%）：利用公式 , 來衡量重復性。

3、理想結果：CV值應低于10%，表示良好的批內一致性。

五、回收率測試

1、加標回收：在已知濃度的樣本中加入已知量的標準品，然后進行ELISA測試。

2、計算回收率：通過公式 , 來評估試劑盒的準確性。

3、理想結果：回收率應在80-120%之間。

六、注意事項

1、‌穩定性差異‌：不同樣本（如感染患者白細胞）的穩定時間可能不同，需針對性驗證。

2、‌試劑盒選擇‌：優先選擇通過加速和長期穩定性驗證的產品，并關注說明書中的穩定性數據。

通過上述方法可全面評估ELISA試劑盒的穩定性，確保其在有效期內和運輸過程中的性能可靠。