微生物培養(yǎng)基滅菌方法說明

       培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。

滅菌的方法，通常可以分為四大類：

1、加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；

2、過濾去菌；

3、射線滅菌和消毒；

4、化學(xué)藥劑滅菌和消毒。

在本實驗中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關(guān)的部份滅菌方法。

1. 干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）

干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等，放入電熱烘箱中。

打開烘箱頂部的通氣孔，接上電源加熱，使箱內(nèi)空氣的溫度達到160℃~170℃，關(guān)閉通氣孔使箱內(nèi)的溫度保持在160℃左右并維持1.5-2h。時間一到，切斷電源。待溫度下降60℃~70℃以下，方可打開箱門取滅菌物品，否則驟冷后易使箱內(nèi)玻璃儀器破損。

2. 加壓蒸氣滅菌法

利用高壓滅菌器，使水的沸點在密閉的滅菌器內(nèi)隨壓力升高而增高（見表6-2），來提高蒸汽的溫度和滅菌的效率。

在同一溫度下濕熱的殺菌效率比干熱大，因為微生物細胞蛋白質(zhì)在濕熱情況下，易干凝固（見表6-3）。同時濕熱的穿透力強，當(dāng)水蒸汽與被滅菌的物品相接觸后，便放出汽化潛熱，逐步提高被滅菌物品的溫度，直至與水蒸汽的溫度相等，達到平衡為止，從而提高滅菌效率。

手提式高壓滅菌鍋滅菌的操作步驟如下：

（1）、在滅菌器內(nèi)加入一定量的水（有的滅菌器內(nèi)加水至止水線）。將用防水紙包扎好的滅菌物品如培養(yǎng)基、無菌水等，放進滅菌器內(nèi)。

（2）、接通電源，進行加熱。

（3）、當(dāng)壓力到達5bl/in2時，打開放氣閥，使鍋內(nèi)的空氣和水蒸汽一同排出，直至壓力表的壓力恢復(fù)到零，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱。

（4）、當(dāng)壓力表＊的壓力到達15bl/in2（即 1.05kg/cm2）時，此時滅菌器內(nèi)的溫度達到121℃，維持30min不變。對熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基滅菌時，應(yīng)適當(dāng)降低壓力，延長時間。

（5）、滅菌時間一到，切斷電源，待壓力下降至零時，才能打開排氣孔，然后打開滅菌器蓋，取出物品。如果滅菌后的固體培養(yǎng)基要做成斜面，需趁熱放置。還需檢查培養(yǎng)基滅菌是否徹di。

3. 間歇滅菌法

常采用阿諾（Arnold）氏滅菌器和柯赫（Koch）氏滅菌器或蒸籠滅菌，常壓條件下蒸汽溫度不超過100℃。在沒有高壓滅菌器設(shè)備的情況下或不宜加壓滅菌的物品，可采用此法滅菌。

方法是：待滅菌物品放在滅菌器或蒸籠里，每d蒸煮1次，每次煮沸l(wèi)h，連續(xù)3d重復(fù)進行。在每兩次蒸煮之間，將物品（指培養(yǎng)基）放在37C恒溫條件下培養(yǎng)過夜，這樣可以使每次蒸煮后未殺死的殘留芽孢萌發(fā)成營養(yǎng)體，以便下1次蒸煮時殺滅。

4. 過濾除菌法

一些不能加熱滅菌的液體物質(zhì)（如維生素、血清），可以用過濾除菌法，一般用細菌過濾器進行除菌。（教師示范）

細菌過濾器中的過濾板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成，過濾板孔眼很小，細菌不能通過。因此，過濾后的液體就除去了細菌。在進行過濾除菌前，整個細菌過濾器和接受液體的器皿，必須要包裝妥當(dāng)并進行加壓蒸汽滅菌后方可使用。

下面介紹石棉板濾器的構(gòu)造及其操作方法。石棉板濾器又稱蔡氏（Scitz）濾器，它是由石棉制成的圓形濾板和一個特制漏斗組成。此漏斗分上下兩節(jié)。上節(jié)為圓形金屬筒，下節(jié)為金屬漏斗。兩節(jié)由三個活動螺旋固定，便于裝卸。使用時拆開兩節(jié)，將濾板放在漏斗上的金屬篩板，再加上上節(jié)，然后將螺旋扭緊，將欲濾溶液置于濾器中抽濾。每次過濾必須用一張無菌的新濾板。石棉板濾器因容積大小不同而有各種型號，石棉板也有不同規(guī)格型號使用時必須根據(jù)需要搭配妥當(dāng)。

5. 紫外線滅菌

波長260~280nm之間的紫外線有很強的殺菌能力，一般紫外燈管能產(chǎn)生253.7nm的紫外光，殺死力強而穩(wěn)定，但穿透力弱一般只適宜物體表面、空氣滅菌。例如接種室、培養(yǎng)室、手術(shù)室、藥廠包裝室等空氣滅菌。一般30w燈管、9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h，就使室內(nèi)空氣滅菌。若照射紫外線時，先噴灑石碳酸等化學(xué)消毒劑，可增強滅菌效果。

在進行微生物接種和分離等操作時，常須用紫外線來殺滅接種室（箱）空氣、臺面等處的微生物。

紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力較弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用于空氣及表面殺菌。

紫外線對眼粘膜及視神經(jīng)有強烈的損傷作用，對皮膚有刺激作用，所以不能直接在紫外線燈開啟下工作和用眼睛直視開啟的紫外燈。

6. 化學(xué)藥劑消毒滅菌

微生物實驗室中常用的化學(xué)殺菌劑有升、甲醛、高錳酸鉀、酒精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液，它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑。